上海纤检凯氏定氮仪实验过程注意事项讨论 

( 1) 样品应是均匀的。

固体样品应预先研细混 匀,液体样品应振摇或搅拌均匀。固体样品一般取样范围为 0. 20 ～ 2. 00g ; 半固 体试样一般取样范围为 2. 00 ～ 5. 00g ; 液体样品取 样 10. 0 ～ 25. 0mL( 约相当氮 30 ～ 40mg ) 。若检测液 体样品,结果以 g /100mL表示。

 ( 2) 样品放入定氮管内时,不要沾附管颈上。

万一沾附可用少量水冲下,以免样品消化不完全,结 果偏低,或者用滤纸包裹好一起投入消化,滤纸影响 通过空白扣除。若样品不易消化至澄清透明,可将 消化液稍冷却,加入数滴过氧化氢后,再继续加热消 化至完全。

 ( 3) 消化时,不要用强火。

应注意消化温度,用 消解仪最好选择曲线加热,防止剧烈反应导致样品 上冲附着在瓶壁上难以彻底消化。若样品含糖高或 含脂较多时,注意控制加热温度,以免大量泡沫喷 出,造成样品损失。可加入少量辛醇或液体石蜡,或 硅消泡剂减少泡沫产生。在整个消化过程中保持和 缓的沸腾,使火力集中在消化管底部,以免附着在壁 上的蛋白质在无硫酸存在的情况下, 使氮有损失。 采用海能公司消解炉 SH 220或 SH 520石墨孔内加 热,阶段升温能够很好地解决此问题。 

( 4) 如硫酸缺少,过多的硫酸钾会引起氨的损 失,这样会形成硫酸氢钾,而不与氨作用。因此,当 硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时,要增 加硫酸的量; 加入硫酸钾的作用是升高溶液的沸点; 催化剂硫酸铜在有机物全部消化后,溶液显清澈透 明的蓝绿色,可用它来指示消化终点。此外,硫酸铜 还可用做下一步蒸馏时碱性反应的指示剂。过氧化 氢为氧化剂,有助于有机物消化,同时可以消除消化 过程中的气泡现象。

 ( 5) 向消化管中加入浓碱时,往往出现褐色沉 淀物,这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应,生 成氢氧化铜,经加热后又分解生成氧化铜的沉淀。 有 时铜 离子 与氨 作用 , 生 成深 蓝色 的结 合物 [Cu (NH 3) 4] 2+, 加入氢氧化钠是否足量,常常影响 整个测定的顺利进行。由反应原理可知,当氢氧化 钠足量时有黑色氧化铜生成而使溶液呈淡黑色; 当 氢氧化钠量不足时就无黑色氧化铜产生而使溶液呈 淡蓝色,所以有无氧化铜颜色存在是判断氢氧化钠 是否足量的标志。

 ( 6) 实验过程中,因蒸馏时反应室的压力大于 大气压力,故可将氨带出。所以,蒸馏时,蒸气要发 生均匀,充足,蒸馏中不得停火断气,否则,会发生倒 吸。传统凯氏实验中,停止蒸馏时,由于反应室外层 的压力突然降低,可使液体倒吸入反应室外层,所 以,操作时,应先将冷凝管下端提离液面并清洗管 口,再蒸一分钟后关掉热源。蒸馏是否完全,可用精 密 pH试纸测冷凝管口的冷凝液来测定,中性则说 明已蒸馏完全。一般情况下建议使用半微量法,因 为如果蒸馏失败的话,半微量法还可继续蒸馏,而常量法只好全部重来,费时费力。

 ( 7) 混合指示剂在碱性溶液中呈绿色,在中性 溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈红色。如果没有溴 甲酚绿,可单独使用 0. 1%甲基红乙醇溶液。 

( 8) 吸收液也可以用 0. 01mo l /L的酸代替硼 酸,过剩的酸液用 0. 01mo l /L碱液滴定,而以硼酸为 氨的吸收液,可省去标定碱液的操作,且硼酸的体积 要求并不严格,亦可免去用移液管,操作比较简便。 另外,硼酸吸收液的温度不应超过 40℃,否则氨吸 收减弱,造成检测结果偏低。可把接收瓶置于冷水 浴中。 

( 9) 硫酸标准溶液配制时,必须将基准无水碳 酸钠于 270 ～ 300℃灼烧至恒重后称取所须用量,否 则也会影响蛋白质测定结果的准确性。硫酸标准溶 液的浓度,常量法中氢离子浓度取 0. 1mo l /L比较合 适,半微量法中则在 0. 02 ～ 0. 05mo l /L之间比较合 适。